Investigações
Primeiras investigações a serem solicitadas
hemograma completo
Exame
Anemia: leve na tripanossomíase humana africana (THA) Gambiense (hemoglobina 100-119 g/L [10.0-11.9 g/dL] em mulheres, 100-129 g/L [10.0-12.9 g/dL] em homens); grave na THA Rhodesiense (<80 g/L [8.0 g/dL]).
Trombocitopenia: leve na THA gambiense (plaquetas de 100 a 150 × 10⁹/L [100,000 a 150,000/microlitro]); pode ser grave na THA rhodesiense (plaquetas <50 × 10⁹/L [<50,000/microlitro]).
Leucocitose moderada (leucócitos de 12 a 25 x 10⁹/L [12,000 a 25,000/microlitro]).
Resultado
anemia, trombocitopenia, leucocitose moderada
velocidade de hemossedimentação
Exame
Não estabelece o diagnóstico, mas é comumente elevada em pacientes infectados.
Resultado
elevada (>20 mm/hora)
imunoglobulinas (Ig) séricas
testes diagnósticos rápidos
Exame
Exame rápido, simples e individual de 15 minutos para a detecção de anticorpos específicos de Trypanosoma brucei gambiense. Sensibilidade entre 89% e 99%, e especificidade entre 88% e 99%, dependendo do exame, amostra e região.[38][39][40][66][67]
A positividade é indicativa da doença, mas devem ser realizados exames parasitológicos adicionais para obter a confirmação.
Esses exames talvez não sejam apropriados para monitorar a resposta ao tratamento.
Não é útil para o diagnóstico de T b rhodesiense.
Resultado
presença de anticorpos específicos para o tripanossomo no sangue
teste de aglutinação em cartão para tripanossomíase (CATT)
Exame
Exame rápido e simples de 10 minutos para a detecção de anticorpos específicos do T b gambiense.[68]
Sensibilidade entre 83% e 98%. Uma falsa negatividade pode ocorrer devido ao efeito prozona (excesso de anticorpos na reação de aglutinação), ou pela ausência do gene do antígeno de CATT (LiTat 1.3) do parasita infectante, como foi observado em alguns focos em Camarões.[69]
Especificidade em torno de 95%, mas com um valor preditivo positivo limitado quando a prevalência é <2%. Podem ocorrer falsos-positivos devido a outras infecções parasitárias.
A positividade é indicativa da doença, mas devem ser realizados exames parasitológicos adicionais para obter a confirmação.
Os anticorpos podem continuar presentes por >5 anos após a cura.[70][71] Por outro lado, a normalização dos níveis de anticorpos não significa que se obteve a cura.[72] Portanto, o método CATT não é útil para monitorar a resposta terapêutica.
Não é útil para o diagnóstico de T b rhodesiense.
Resultado
anticorpo do sangue total positivo; anticorpo do soro ou plasma positivo em diluição 1:4 ou maior.
imunofluorescência
Exame
Para T b gambiense: sensibilidade de 75% a 95%.[73][74]
Para T b rhodesiense: sensibilidade de 71% a 92%.[75][76][77]
Especificidade >90%. A positividade é indicativa da doença, mas devem ser realizados exames parasitológicos adicionais para obter a confirmação.
Resultado
positivo para anticorpos diluídos no plasma ou no soro
ensaio de imunoadsorção enzimática (ELISA)
Exame
ELISA indireto (ELISA/T b gambiense) tem sensibilidade de 95% a 100%; especificidade de 97% a 100%.[78][79][80][81]
A positividade é indicativa da doença, mas devem ser realizados exames parasitológicos adicionais para obter a confirmação.
Resultado
positivo para anticorpos no soro, no plasma ou na saliva
microscopia do aspirado do cancro de inoculação
Exame
Uma maneira mais antiga de diagnóstico de infecção por tripanossomo. O achado de tripanossomos estabelece o diagnóstico definitivo.
Especialmente útil para o diagnóstico de infecção por T b rhodesiense.
Cancros de inoculação raramente ocorrem em pacientes infectados por T b gambiense.
Resultado
preparado fresco ou corado contendo tripomastigotas
microscopia do aspirado de linfonodos
Exame
Especialmente útil para o diagnóstico de infecção por T b gambiense. O achado de tripanossomos estabelece o diagnóstico definitivo. Sensibilidade de 40% a 80%.
Linfonodos cervicais aumentados raramente estão presentes em pacientes infectados por T b rhodesiense.
Resultado
preparado fresco contendo tripomastigotas
microscopia do sangue
Exame
O achado de tripanossomos estabelece o diagnóstico definitivo. O esfregaço fino com preparado fresco ou coloração tem sensibilidade insuficiente para o diagnóstico da infecção por T b gambiense porque o limite de detecção é de aproximadamente apenas 6000 a 10,000 tripanossomos/mL.
O limite de detecção do esfregaço espesso é de 600 a 5000 tripanossomos/mL; portanto, uma sensibilidade limitada de 30% a 40% para o T b gambiense.[41][42] Devido à alta parasitemia, a infecção por T b rhodesiense é geralmente detectada com a aplicação dessas técnicas. Para o diagnóstico da infecção por T b gambiense, são preferidas as técnicas de concentração, devido à parasitemia normalmente baixa.[Figure caption and citation for the preceding image starts]: Espécie Trypanosoma brucei em esfregaço sanguíneo espesso corado com GiemsaDo acervo do Dr V. Lejon [Citation ends].
Resultado
preparado fresco ou corado contendo tripomastigotas
técnica de centrifugação de micro-hematócrito
Exame
Uma técnica de concentração com limite de detecção de 500 a 600 tripanossomos/mL.[82] O achado de tripanossomos estabelece o diagnóstico definitivo. Especialmente útil na detecção do T b gambiense com sensibilidades de cerca de 50% a 60%.[41][42]
A sensibilidade aumenta com o número de capilares examinados (mínimo 2).
Profissionais da saúde inexperientes podem ter dificuldade em reconhecer os tripanossomos.
Resultado
tripanossomos móveis presentes dentro e sobre a camada leucoplaquetária
quantitative buffy coat technique
Exame
Técnica de concentração com limite de detecção de 15 a 300 tripanossomos/mL.[83] O achado de tripanossomos estabelece o diagnóstico definitivo. Especialmente útil para o T b gambiense. Junto à técnica de centrifugação de minitroca de ânion, melhor exame com sensibilidade de cerca de 80% a 90%.[84]
Resultado
tripanossomos móveis com cinetoplastos e núcleo fluorescentes entre os leucócitos na camada leucoplaquetária expandida
técnica de centrifugação de minitroca de ânion (mAECT)
Exame
Uma técnica de concentração com limite de detecção de 15 a 100 tripanossomos/mL.[85][86] O achado de tripanossomos estabelece o diagnóstico definitivo.
Especialmente útil para o T b gambiense. É o melhor teste, com sensibilidade de 75% a 85%.[41][42] A sensibilidade pode ser elevada para 91% a 96% quando a camada leucoplaquetária de maiores volumes de sangue é aplicada na coluna.[43][44]
O sangue deve ser coletado em heparina; o ácido etilenodiamino tetra-acético deve ser evitado, pois pode interferir na ligação dos eritrócitos ao gel. O uso da camada leucoplaquetária concentrada pode melhorar a sensibilidade.[43]
A técnica mAECT está disponível apenas em unidades de produção na República Democrática do Congo e Costa do Marfim, e portanto, limitada a estruturas de saúde especializadas em THA.
Resultado
tripanossomos móveis em coluna de filtração
Investigações a serem consideradas
eletrocardiograma
celularidade do líquido cefalorraquidiano (LCR)
Exame
O exame do LCR geralmente é realizado para estadiamento da doença, após tripanossomas serem encontrados em outros fluidos corporais, ou em caso de suspeita muito alta de THA (por exemplo, título final de CATT elevado e/ou sintomas neurológicos altamente sugestivos, em um contexto epidemiológico de transmissão bem conhecida da doença).
A punção lombar não é obrigatória em pacientes com THA gambiense que são elegíveis para tratamento com fexinidazol. Os pacientes que podem ser tratados sem punção lombar são pacientes com idade ≥6 anos e peso corporal ≥20 kg que atendem às seguintes condições: baixo índice de suspeita de doença grave com base no julgamento clínico; e alta confiança de que o paciente terá acompanhamento adequado para detectar recidiva precocemente. Os pacientes que não atendem aos critérios acima ou que rejeitam ou não toleram o fexinidazol necessitam de uma punção lombar.[32]
A pleocitose consiste principalmente em linfócitos B (CD19+).[87]
As células morulares ou células de Mott, que são plasmócitos com grandes vesículas contendo IgM, podem estar presentes e são indicativas de doença em segundo estágio.[36]
Resultado
primeiro estágio (estágio hemolinfático): ≤5 leucócitos/microlitro e ausência de tripanossomas; segundo estágio (estágio meningoencefalítico): >5 leucócitos/microlitro ou tripanossomas; segundo estágio grave (estágio meningoencefalítico grave): ≥100 leucócitos/microlitro com ou sem tripanossomas
microscopia do LCR
Exame
A sensibilidade de técnicas simples (preparados frescos ou corados) é bastante limitada. São recomendadas técnicas de concentração para o LCR, especialmente para a avaliação de desfecho do tratamento. O achado de tripanossomos estabelece o diagnóstico definitivo do segundo estágio da doença.
Resultado
presença de tripanossomos no segundo estágio da doença
centrifugação dupla do LCR
Exame
Técnica de concentração para o LCR.[88] A sensibilidade aumenta com o volume de LCR centrifugado. O achado de tripanossomos estabelece o diagnóstico definitivo do segundo estágio da doença.
Resultado
presença de tripanossomos entre o depósito de leucócitos no fundo do capilar na doença em segundo estágio
centrifugação única modificada de LCR
Exame
Técnica de concentração para o LCR.[85][89][90] A sensibilidade aumenta com o volume de LCR centrifugado. O achado de tripanossomos estabelece o diagnóstico definitivo do segundo estágio da doença.
Resultado
presença de tripanossomos na ponta do tubo entre o depósito de leucócitos na doença em segundo estágio
nível de proteína no LCR
Exame
Já aumentada no estágio inicial e, portanto, não é mais recomendada para o estadiamento da doença.[91]
Resultado
com discreta elevação
Novos exames
reação em cadeia da polimerase
Exame
A maioria dos primers é específica para o subgênero Trypanozoon e derivada de sequências satélites ou de genes multicópias, fornecendo limites de detecção de 1 a 40 tripanossomos/mL e altas sensibilidades.[92][93][94][95] As especificidades diagnósticas são de 97% ou superiores, mas essas reações em cadeia da polimerase não diferenciam entre as infecções por T b gambiense e T b rhodesiense, sendo possíveis reações positivas com o T b brucei, T evansi e T equiperdum.
A diferenciação entre infecção por T b gambiente e T b rhodesiense é possível usando o gene associado à resistência sérica (SRA) para T b rhodesiense, e para T b gambiente, o gene de glicoproteína específica de T b gambiense (TgsGP).[96][97][98][99] O uso de uma única cópia desses genes oferece menor sensibilidade. Há uma falta de padronização e estudos comparativos. A importância do estadiamento de uma reação em cadeia da polimerase positiva sobre o LCR permanece incerta.[100] A reação em cadeia da polimerase não mostrou ser confiável para determinar a avaliação do desfecho do tratamento.[101][102][103]
Outras técnicas moleculares incluem o ensaio de amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP), amplificação baseada na sequência do ácido nucleico (NASBA) e oligocromatografia, mas padronização e validação adequadas são necessárias.[95][104][105][106][107][108][109] Na primeira avaliação de amostras clínicas da tripanossomíase humana africana causada por T b gambiense, o Kit de Detecção Loopamp (nome comercial) do Trypanosoma brucei, baseado na detecção do DNA do elemento móvel de inserção repetitiva (RIME) do Trypanozoon, mostrou desempenho semelhante ao da reação em cadeia da polimerase convencional.[110]
A positividade na reação em cadeia da polimerase ou na LAMP é indicativa da tripanossomíase humana africana, mas devem ser realizados exames parasitológicos adicionais para se obter a confirmação.
Resultado
ácido desoxirribonucleico (DNA) tripanossômico
reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR) em tempo real
Exame
Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR) para detecção de ácido ribonucleico (RNA) líder para processamento específico do Trypanozoon no sangue demonstrou sensibilidade de 92% a 97% e especificidade >95%.[54][55][56] É precisa para estadiamento da doença e considerada mais confiável que a reação em cadeia da polimerase para avaliação do desfecho do tratamento. Outros alvos de RNA e outros formatos de detecção de ácido nucleico estão surgindo, mas precisam de avaliação mais aprofundada do seu desempenho diagnóstico.
Resultado
RNA tripanossômico
produção de imunoglobulina intratecal
Exame
Altas concentrações de IgM de >100 mg/L são comuns no LCR de pacientes em segundo estágio infectados por T b gambiense.[17]
O cálculo da fração de IgM intratecal mostra um padrão de resposta imune de IgM dominante.[17][18] A detecção de IgG oligoclonal pode ser negativa.[111] A positividade é indicativa do segundo estágio da doença, mas devem ser realizados exames parasitológicos adicionais para se obter a confirmação.
Resultado
produção de IgM intratecal
biomarcadores de estágios
Exame
Diferentes proteínas do LCR e marcadores de ativação do sistema imunológico celular estão sendo investigados como marcadores para estadiamento e avaliação de desfechos de tratamento.[51][52][53]
Resultado
positivo para marcadores de estágio inicial na doença em primeiro estágio e para marcadores tardios na doença em segundo estágio
teste imunológico de tripanólise
Exame
Os tripanossomos T b gambiense vivos são incubados com soro ou plasma humanos. O exame pode ser realizado apenas em laboratórios altamente especializados.[49][50] A especificidade do teste imunológico de tripanólise é considerada 100%, e um resultado positivo parece ser um indicador do contato com o T b gambiense.
Resultado
os parasitas serão mortos pela lise complementar mediada por anticorpos se a amostra do teste contiver anticorpos específicos do T b gambiense
ELISA de inibição de T b gambiense (g-iELISA)
Exame
O g-iELISA foi desenvolvido como uma alternativa fácil de usar para a tripanólise imunológica, que pode ser realizada em qualquer laboratório equipado para ELISA. Usando a tripanólise como teste de referência, o g-iELISA demonstrou ter 98.0% e 92.6% de sensibilidade e 99.5% e 100% de especificidade em, respectivamente, plasma e amostras de sangue impregnado em papel filtro.[112]
Resultado
anticorpos do sangue de pacientes com THA gambiense inibem a ligação de anticorpos monoclonais marcados ao seu epítopo específico do tripanossomo correspondente
ressonância nuclear magnética (RNM) cranioencefálica
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